实验研究
- 论文
- 摘要：目的 明确四逆散对Graves病模型小鼠的干预作用，从免疫中枢（脾脏）、体液循环（血清）及靶器官（甲状腺）3个层面探讨四逆散对Th1/Th2/Th17细胞免疫失衡的调控机制。方法 将24只雌性BALB/c小鼠按随机数字表法分为正常组（n=6）及造模组（n=18），采用肌内注射Ad-TSHR289腺病毒的方法复制Graves病模型。将成模小鼠按随机数字表法分为模型组、甲巯咪唑组（4.55×10-3g/kg）及四逆散组（5.46 g/kg），并灌胃相应药物，每日1次，连续6周。使用HE染色法观察甲状腺滤泡上皮细胞病理改变；放射免疫法检测血清促甲状腺激素受体抗体（TRAb）、甲状腺素（T4）水平；流式细胞术检测脾脏组织Th1、Th2、Th17细胞占比；定量反转录PCR法和蛋白质印迹法检测脾脏组织Th1细胞分泌的γ干扰素（IFN-γ）、Th2细胞分泌的白细胞介素（IL）-4及Th17细胞分泌的IL-17A的mRNA与蛋白表达；Luminex蛋白生物芯片检测血清IFN-γ、IL-4、IL-10、IL-17A，以及调节正常T细胞表达和分泌的活化因子（RANTES）、巨噬细胞炎症蛋白-1β（MIP-1β）、单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）的水平；免疫组织化学法检测甲状腺组织IFN-γ、IL-4、IL-17A定位及表达。结果 四逆散可减小模型小鼠甲状腺体积，降低血清TRAb和T4水平（P＜0.01），改善甲状腺滤泡结构病理损伤，减轻脾脏肿大。机制研究结果发现，与正常组比较，模型组脾脏组织Th1细胞占比、Th17细胞占比及Th1/Th2比值有上升趋势，Th2细胞占比有下降趋势；脾脏组织IFN-γ、IL-17A mRNA表达及IFN-γ蛋白表达上调（P＜0.01），IL-17A蛋白表达呈上调趋势，IL-4 mRNA表达下调（P＜0.01）；血清IFN-γ、IL-10、RANTES水平升高（P＜0.01），IL-17A、MIP-1β、MCP-1水平呈升高趋势，IL-4水平呈降低趋势；甲状腺组织IFN-γ、IL-4、IL-17A蛋白阳性表达水平均有所升高，提示Graves病模型小鼠存在Th1/Th2/Th17细胞免疫失衡。甲巯咪唑及四逆散可调节Graves病模型小鼠脾脏、甲状腺及血清IFN-γ、IL-4、IL-17A等表达，亦可调节RANTES、MIP-1β、MCP-1等趋化因子表达。结论 四逆散可能通过调控Th1/Th2/Th17细胞免疫失衡及RANTES、MIP-1β、MCP-1趋化因子表达而干预Graves病所致的甲状腺肿大。关键词：四逆散;Graves病;甲状腺肿大;免疫失衡;小鼠176|106|0<HTML><网络PDF>更新时间：2026-08-05
- 摘要：目的 探讨加味补阳还五汤调控肝细胞生长因子（HGF），抑制转化生长因子-β1（TGF-β1）/Smad3信号通路，减少腹膜间皮细胞（PMCs）上皮-间充质转化（EMT），从而防治术后腹腔粘连（PAA）作用机制。方法 将60只雄性SD大鼠按照随机数字表法分为4组:正常组、模型组、Smad3抑制剂组、加味补阳还五汤组，每组15只。除正常组外，其余各组大鼠均参照“多因素损伤法”制作PAA模型；术后第1 d Smad3抑制剂组按剂量5×10-3g/kg进行腹腔注射SIS3溶液，中药组按照21 g/kg的剂量灌胃，模型组和正常组灌胃等体积生理盐水。术后28 d处死各组大鼠进行取材，对粘连组织进行HE染色及Masson染色评估粘连组织病理变化，免疫组织化学法检测大网膜脂肪组织及盲肠浆膜组织中HGF、上皮钙黏素（E-cad）及α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达水平；定量反转录PCR法检测粘连组织TGF-β1及Smad3 mRNA表达水平；蛋白质印迹法检测HGF、E-cad、α-SMA、TGF-β1及磷酸化Smad3（p-Smad3）蛋白表达水平。结果 与正常组比较，模型组盲肠浆膜层PMCs排列紊乱、结构松散，纤维结缔组织增生、炎性细胞浸润及胶原纤维沉积明显增加；大网膜脂肪组织HGF和盲肠浆膜组织HGF、TGF-β1、p-Smad3及α-SMA表达升高（P＜0.05，P＜0.01），E-cad表达降低（P＜0.05，P＜0.01）。与模型组比较，加味补阳还五汤组和Smad3抑制剂组浆膜层PMCs排列有序、紧密，局部仅见少量纤维结缔组织增生，炎性细胞浸润较模型组显著减轻，胶原纤维增生较模型组明显减少，PMCs排列紧凑，大鼠大网膜脂肪组织HGF、盲肠浆膜组织HGF及E-cad表达水平均升高（P＜0.05），盲肠浆膜组织TGF-β1、p-Smad3和α-SMA的表达降低（P＜0.01，P＜0.05）。结论 加味补阳还五汤防治PAA作用机制可能通过促进腹膜旁分泌HGF，抑制TGF-β1/Smad3信号通路和减少PMCs EMT实现的。关键词：术后腹腔粘连;加味补阳还五汤;脂肪干细胞;肝细胞生长因子;上皮-间充质转化;大鼠332|27|0<HTML><网络PDF>更新时间：2026-08-05
- 摘要：目的 探讨益气活血方对心肌梗死后血管新生的影响及其与线粒体相关内质网膜（MAMs）相关的调控机制。方法 将30只SD雄性大鼠按随机数字表法分为假手术组（n=6）及造模组（n=24），采用冠状动脉前降支结扎法构建心肌梗死模型，假手术组冠状动脉前降支只穿线不结扎。将成模大鼠按随机数字表法分为模型组、益气活血方低剂量组（4.1 g/kg）、益气活血方高剂量组（8.2 g/kg）及培哚普利组（4.0×10-4g/kg），每组6只。各组连续灌胃28 d（每日1次）后，取材并检测指标。使用心脏超声仪检测心功能；ELISA法检测血清乳酸脱氢酶（LDH）及内皮素-1（ET-1）水平；HE染色与Masson染色法观察心肌组织病理形态与纤维增生情况；免疫组织化学法检测血小板内皮细胞黏附分子（CD31）表达；蛋白质印迹法检测CD31、血管内皮生长因子（VEGF），以及肌醇1，4，5-三磷酸受体2（IP3R2）、葡萄糖调节蛋白75（GRP75）、电压依赖性阴离子选择性通道1（VDAC1）、线粒体融合蛋白2（MFN2）等MAMs相关蛋白的表达。结果 模型组大鼠的心功能参数较假手术组发生了明显变化，具体表现为:左心室射血分数及左心室短轴缩短率降低（P＜0.05），左心室收缩末期容积及左心室舒张末期容积升高（P＜0.05）。益气活血方或培哚普利干预后，心功能指标均得到明显改善（P＜0.05）。ELISA检测及病理染色结果显示，模型组LDH及ET-1水平增高（P＜0.05），心肌细胞排列紊乱、炎性浸润及胶原纤维增生明显，各给药组LDH及ET-1水平降低（P＜0.05）、心肌组织病理学改变均得到缓解。免疫组织化学染色结果表明，模型组心肌组织的CD31染色强度高于假手术组，且各给药组该阳性染色强度进一步增强（P＜0.05）。蛋白质印迹法结果证实，模型组心肌组织中CD31与VEGF蛋白表达量均高于假手术组（P＜0.05）；各给药组CD31与VEGF蛋白表达进一步上调（P＜0.05）。同时，模型组MAMs相关蛋白IP3R2、GRP75、VDAC1表达上调，MFN2表达下调（P＜0.05）；各给药组可回调这些蛋白的表达水平（P＜0.05）。结论 益气活血方对心肌梗死大鼠心功能与心肌组织具有保护作用，可能与其上调CD31、VEGF表达，调节MAMs相关蛋白IP3R2、GRP75、VDAC1、MFN2的表达以促进血管新生、增强内皮细胞功能有关。关键词：心肌梗死;血管新生;线粒体相关内质网膜;益气活血方;大鼠141|25|0<HTML><网络PDF>更新时间：2026-08-05
- 摘要：目的 利用代谢组学、转录组学揭示肝纤维化肝阴虚证大鼠的生物内涵，为肝纤维化病证结合动物模型的构建提供科学的实验依据和方法借鉴。方法 将30只雄性SD大鼠按照体质量随机分为正常组、模型组、知柏地黄丸组，每组10只。模型组、知柏地黄丸组灌胃甲状腺片混悬液（80 mg/kg），每日1次；并腹腔注射50% CCl4橄榄油溶液（1.5 mL/kg），每周2次，以制备肝纤维化肝阴虚证大鼠模型。正常组仅灌胃等体积蒸馏水，并腹腔注射等体积橄榄油溶液。造模的同时给药，知柏地黄丸组灌胃知柏地黄丸混悬液（408 mg/kg），每日1次，造模、给药2周。称量肝脏质量，计算肝脏脏器指数，检测大鼠血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、总胆红素（TBIL）、总胆汁酸（TBA）、γ-谷氨酰转肽酶（γ-GT）、碱性磷酸酶（ALP）、层粘连蛋白（LN）、透明质酸（HA）、转化生长因子β1（TGF-β1）、基质金属蛋白酶2（MMP-2）含量，检测大鼠肝组织肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素（IL）-1β、IL-6、IL-10、丙二醛（MDA）、还原型谷胱甘肽（GSH）含量及过氧化氢酶（CAT）、总超氧化物歧化酶（T-SOD）活力；苏木素-伊红（HE）染色观察大鼠肝组织损伤情况，马松染色、天狼星红染色观察大鼠肝组织胶原纤维形成和分布情况，免疫组织化学染色检测大鼠肝组织平滑肌肌动蛋白α（α-SMA）阳性表达。监测大鼠肝阴虚证候表征，即体质量，24 h摄食量，24 h摄水量，肛温，舌面含水量，总体体征评分（包括精神状态、毛发、大便和小便评分）；检测大鼠血清环磷酸腺苷（cAMP）、环磷酸鸟苷（cGMP）、三碘甲状腺原氨酸（T3）、甲状腺素（T4）含量，计算cAMP/cGMP；并将正常组、模型组的舌面含水量、肛温与阴虚相关指标（血清cAMP、cGMP、T3、T4含量）做相关性分析。使用代谢组学和转录组学技术分别探究正常组、模型组肝组织差异代谢物、差异表达基因及其富集通路，并进行组学联合分析。在正常组、模型组大鼠中检测肝组织腺苷一磷酸（AMP）含量、水通道蛋白7（Aqp7）mRNA表达，并将其与阴虚相关指标做相关性分析。结果 与正常组比较，模型组大鼠肝脏脏器指数增加，血清ALT、AST、TBIL、TBA、γ-GT、ALP、LN、HA、TGF-β1、cAMP、T3、T4含量及cAMP/cGMP升高，MMP-2、cGMP含量降低（P＜0.05）；肝组织IL-10、GSH含量和CAT、T-SOD活力降低，TNF-α、IL-1β、IL-6、MDA含量升高（P＜0.05）；HE染色见肝细胞脂肪变性、气球样变性、纤维组织增生，马松染色、天狼星红染色分别可见蓝色、红色胶原纤维增加；肝组织胶原纤维、α-SMA面积百分比增加（P＜0.05）；24 h摄水量、肛温增加，总体体征、精神状态、毛发、小便评分增加，体质量、舌面含水量、大便评分降低（P＜0.05）。与模型组比较，知柏地黄丸组除体质量外，以上指标均逆转（P＜0.05）。正常组和模型组中，舌面含水量与cAMP、T3、T4呈极强负相关，与cGMP呈极强正相关（P＜0.05）；肛温与cAMP、T3、T4呈极强正相关，与cGMP呈极强负相关（P＜0.05）。肝组织代谢组学发现247个显著差异代谢物，主要与cGMP-蛋白激酶G、cAMP信号通路等代谢途径有关；转录组学发现2568个显著差异表达基因，主要与细胞因子-细胞因子受体相互作用、细胞外基质受体相互作用等转录途径有关；组学联合分析发现，显著交集信号通路为脂肪细胞脂解的调节、抗坏血酸和醛酸代谢、嘌呤代谢。实验验证结果显示，与正常组比较，模型组大鼠肝组织AMP含量、Aqp7 mRNA表达均增加（P＜0.05）；AMP含量与cAMP、T3、T4呈极强正相关，与cGMP呈极强负相关（P＜0.05）；Aqp7 mRNA表达与cAMP、T3、T4呈强正相关，与cGMP呈强负相关（P＜0.05）。结论 本研究构建了肝纤维化肝阴虚证病证结合动物模型，经多组学技术表明，该模型的病理改变、证候表现与临床相符，同时可从代谢物及基因层面阐释其证候学与病理学机制，为该病证结合动物模型的应用提供了更多的生物学依据。关键词：肝纤维化;肝阴虚证;代谢组学;转录组学;模型构建;大鼠207|95|0<HTML><网络PDF>更新时间：2026-07-02
- 摘要：目的 观察寿胎丸对复发性流产（RSA）小鼠子宫内膜基质细胞（ESCs）衰老的调控，探讨寿胎丸延缓ESCs过度衰老、促进蜕膜化实现保胎作用的机制。方法 将80只6～8周龄CBA/J雌鼠按随机数字表法分为正常组、模型组、寿胎丸组（15.17 g/kg）和地屈孕酮组（3.00×10-3 g/kg），每组20只。每日灌胃1次，连续14 d。然后，按雌:雄=2:1的比例合笼，其中，正常组雌鼠与BALB/c雄鼠合笼；其余组雌鼠与DBA/2雄鼠合笼，复制RSA模型。雌鼠怀孕后如前灌胃。妊娠第6天，采集各组部分孕鼠血清和蜕膜组织。 HE染色法观察蜕膜组织ESCs的形态；ELISA法测定血清中蜕膜化标志物[胰岛素样生长因子结合蛋白1（IGFBP1）、泌乳素（PRL）]含量；衰老相关β-半乳糖苷酶（SA-β-gal）活性测定法观察ESCs衰老情况；免疫组织化学法、免疫荧光法、蛋白质印迹法及定量反转录PCR检测蜕膜组织中IGFBP1、PRL、磷酸化组蛋白H2AX（γ-H2AX）、磷酸化P53蛋白（p-P53）、周期素依赖性激酶抑制蛋白1A（P21）蛋白及mRNA表达水平。妊娠第10天，统计各组剩余孕鼠胚胎丢失情况。结果 与正常组比较，模型组小鼠胚胎丢失率增加（P＜0.05）。蜕膜组织ESCs排列疏松、紊乱，间质血管减少，部分细胞空泡化；IGFBP1、PRL蛋白及mRNA表达下调（P＜0.05），血清含量相应降低（P＜0.05）；SA-β-gal活性增强（P＜0.05）；γ-H2AX、p-P53、P21蛋白及mRNA表达均上调（P＜0.05）。与模型组比较，寿胎丸组和地屈孕酮组小鼠胚胎丢失率下降（P＜0.05）。蜕膜组织ESCs排列紧密、整齐，间质血管增加，胞质丰富；IGFBP1、PRL蛋白及mRNA表达上调（P＜0.05），血清含量相应升高（P＜0.05）；SA-β-gal活性减弱（P＜0.05）；γ-H2AX、p-P53、P21蛋白及mRNA表达下调（P＜0.05）。结论 寿胎丸可能通过延缓RSA小鼠ESCs过度衰老，促进蜕膜化，从而发挥保胎作用。关键词：复发性流产;寿胎丸;细胞衰老;蜕膜化;子宫内膜基质细胞;小鼠198|135|0<HTML><网络PDF>更新时间：2026-07-02
- 摘要：目的 探讨肝豆灵通过调控长链非编码RNA母系表达基因3（LncRNA Meg3），激活磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路，调控肝星状细胞自噬，改善肝豆状核变性肝纤维化的作用机制。方法 采用随机数字表法将24只SD大鼠分为空白对照组（n=6）、肝豆灵组（n=18）。肝豆灵组大鼠灌胃肝豆灵混悬液（0.96 g/kg），空白对照组大鼠灌胃等体积生理盐水，1次/d，连续7 d，制备含药血清和空白血清。采用五水合硫酸铜（CuSO4·5H2 O）刺激人肝星状细胞系LX-2构建铜负荷细胞模型，采用CCK-8法筛选CuSO4·5H2 O最佳造模浓度及干预时间、肝豆灵含药血清最佳体积分数及干预时间。将LX-2细胞分为对照组、模型组、肝豆灵组、pcDNA3.1-Meg3组、pcDNA3.1-NC组，分别进行相应干预。采用5-乙炔基-2′-脱氧尿嘧啶核苷（EdU）实验检测细胞增殖情况；采用激光共聚焦显微镜观察细胞自噬流变化；采用透射电子显微镜观察细胞超微结构；采用蛋白质印迹法检测自噬关键分子酵母Atg6同系物（Beclin-1）、微管相关蛋白1轻链3（LC3）-Ⅱ/LC3-Ⅰ、泛素结合蛋白p62（p62），肝星状细胞活化标志物Ⅰ型胶原蛋白（Collagen Ⅰ）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA），以及PI3K/Akt/mTOR通路磷酸化蛋白（p-PI3K、p-Akt、p-mTOR）与总蛋白的相对表达；实时荧光定量PCR法检测Collagen Ⅰ、α-SMA、LncRNA Meg3、PI3K、Akt、mTOR的mRNA表达。结果 100 μmol/L CuSO4·5H2 O作用48 h为铜负荷LX-2细胞最佳造模条件，10%肝豆灵含药血清作用48 h为最佳干预条件。与模型组比较，肝豆灵组、pcDNA3.1-Meg3组绿色荧光点减少，相对荧光强度均降低（P＜0.05）；激光共聚焦显微镜可见自噬溶酶体数量减少（P＜0.05）；透射电子显微镜见自噬体和自噬溶酶体数量减少；Beclin-1蛋白表达、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ下调（均P＜0.05），p62蛋白表达升高（P＜0.05），Collagen Ⅰ、α-SMA的蛋白及mRNA表达均降低（P＜0.05），PI3K/Akt/mTOR通路mRNA表达及p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR上调（均P＜0.05）。此外，与模型组比较，肝豆灵组LncRNA Meg3的mRNA表达升高（P＜0.05）。结论 肝豆灵可通过上调LncRNA Meg3表达，激活PI3K/Akt/mTOR信号通路，抑制铜负荷LX-2细胞的异常自噬，从而延缓肝豆状核变性肝纤维化进程；LncRNA Meg3可能是肝豆灵改善肝豆状核变性肝纤维化的潜在关键靶点。关键词：肝豆灵;肝豆状核变性;长链非编码RNA母系表达基因3;自噬;肝纤维化176|34|0<HTML><网络PDF>更新时间：2026-07-02
- 摘要：目的 探讨青盲一号方治疗外伤性视神经病变模型大鼠的作用及机制。方法 采用随机数字表法将30只SPF级健康雄性Wistar大鼠分为假手术组、模型组和青盲一号方组，每组10只。采用视神经横向牵拉法建立大鼠外伤性视神经病变模型。造模后，青盲一号方组大鼠灌胃青盲一号方水煎液（13g/kg），假手术组和模型组灌胃等体积蒸馏水，每日1次，连续14d。采用眼底彩色照相观察视盘及视网膜外观；视觉电生理仪检测闪光视觉诱发电位；光学相干断层成像评估视网膜形态；HE染色观察视网膜病理形态；转录组学技术分析视网膜差异表达基因，并进行基因本体论（GO）功能和京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析；酶联免疫吸附测定法检测视网膜丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活性；蛋白质印迹法检测视网膜纤连蛋白（FN）、髓鞘蛋白脂质蛋白1（PLP1）及髓鞘少突胶质细胞糖蛋白（MOG）蛋白表达。结果 与假手术组比较，模型组大鼠视盘色淡，视网膜血管变细，视网膜薄变；闪光视觉诱发电位N1-P1振幅升高；神经节细胞层（GCL）细胞数量降低（P＜0.05）。与模型组比较，青盲一号方组视网膜形态改善；N1-P1振幅降低；视网膜病理结构改善，GCL细胞数量升高（P＜0.05）。与假手术组比较，模型组共有1296个差异表达基因（上调615个，下调681个）:GO功能富集分析显示，差异表达基因主要富集于膜相关细胞组分与转运功能等过程；KEGG通路富集分析主要富集于蛋白合成与能量代谢、结构/黏附与神经传导相关通路。与模型组比较，青盲一号方组共有499个差异表达基因（上调368个，下调131个）:GO功能富集分析显示，差异表达基因主要富集于细胞外基质、胶原、神经传导结构与髓鞘等相关功能；KEGG通路富集分析主要富集于膜-细胞外基质互作和存活信号相关通路，以及免疫清除与代谢重编程相关通路。关键差异表达基因有MOG、PLP1等。与假手术组比较，模型组大鼠视网膜SOD活性及PLP1、MOG蛋白表达降低，MDA含量及FN蛋白表达升高（P＜0.05）。与模型组比较，青盲一号方组PLP1蛋白表达升高，FN蛋白表达降低（P＜0.05）。结论 青盲一号方能有效减轻外伤性视神经病变模型大鼠视网膜结构损伤，促进视路传导功能恢复。其潜在机制可能涉及髓鞘修复、细胞外基质重塑及氧化应激的调控。关键词：外伤性视神经病变;青盲一号方;转录组学;神经脱髓鞘;细胞外基质;大鼠145|167|0<HTML><网络PDF>更新时间：2026-06-01
- 摘要：目的 探讨补肾调经方促进高龄小鼠卵巢颗粒细胞增殖和类固醇激素合成的作用机制。方法 将20只7～8周龄雌性ICR小鼠作为对照组（灌胃蒸馏水），80只9～10月龄雌性ICR小鼠按随机数字表法平均分为模型组（灌胃蒸馏水）、补肾调经方低剂量组[灌胃补肾调经方（25.6g/kg）]、补肾调经方高剂量组[灌胃补肾调经方（51.2g/kg）]、白血病抑制因子（LIF）抑制剂组[灌胃补肾调经方（51.2g/kg）+腹腔注射EC330（5.0×10-4g/kg）]。各组每日灌胃或腹腔注射1次，连续30d。采用阴道脱落细胞涂片法观察小鼠动情周期变化，ELISA法检测性激素水平，定量反转录PCR及蛋白质印迹法检测颗粒细胞中增殖细胞核抗原（PCNA）、细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）、类固醇急性调节蛋白（StAR）、3β-羟基类固醇脱氢酶（3β-HSD）、细胞色素P450家族19A1（CYP19A1）、LIF、LIF受体（LIFR）的mRNA及蛋白表达水平，免疫组织化学法检测LIF及LIFR表达情况。结果 与对照组比较，模型组小鼠动情周期紊乱、周期延长（P＜0.05），雌二醇（E2）、孕酮（P4）水平降低（P＜0.05），卵泡刺激素（FSH）、黄体生成素（LH）水平及FSH/LH值升高（P＜0.05），颗粒细胞PCNA、Cyclin D1、StAR、3β-HSD、CYP19A1、LIF及LIFR mRNA和蛋白表达水平降低（P＜0.05）。与模型组比较，补肾调经方各组小鼠动情周期较规律，动情周期缩短（P＜0.05），E2、P4水平升高（P＜0.05），FSH、LH水平及FSH/LH值降低（P＜0.05），颗粒细胞PCNA、Cyclin D1、StAR、3β-HSD、CYP19A1、LIF及LIFR mRNA和蛋白表达水平升高（P＜0.05）。与补肾调经方高剂量组比较，LIF抑制剂组小鼠动情周期紊乱、周期延长（P＜0.05），E2、P4水平降低（P＜0.05），FSH、LH水平及FSH/LH升高（P＜0.05），颗粒细胞PCNA、Cyclin D1、StAR、3β-HSD、CYP19A1及LIFR mRNA和蛋白表达水平降低（P＜0.05）。结论 补肾调经方可能是通过上调LIF及其受体，介导颗粒细胞增殖及类固醇激素合成，从而改善卵巢储备功能、促进卵泡发育。关键词：补肾调经方;白血病抑制因子;颗粒细胞;类固醇激素;小鼠116|27|0<HTML><网络PDF>更新时间：2026-06-01
- 摘要：目的 研究芪芎左归复方调控骨髓间充质干细胞源性外泌体对衰老大脑中动脉闭塞-再灌注（MCAO/R）大鼠模型神经功能的影响。方法 按照随机数字表法将雄性SPF级SD大鼠分为5组：青年假手术组、衰老假手术组、衰老MCAO/R组、空白血清干预的外泌体组及含药血清干预的外泌体组，每组15只。除青年假手术组（注射生理盐水）外，其余各组通过每日腹腔注射D-半乳糖（500mg/kg，连续8周）建立衰老大鼠模型。末次注射后，衰老MCAO/R组、空白血清干预的外泌体组及含药血清干预的外泌体组采用改良线栓法复制MCAO/R模型，假手术组仅分离血管与神经。采用差速离心法提取外泌体，经透射电子显微镜、纳米颗粒追踪分析及蛋白质印迹法鉴定。术后24、72h，外泌体组经尾静脉注射等体积的空白血清干预的外泌体或含药血清（10%）干预的外泌体。术后7d取材。通过2，3，5-氯化三苯基四氮唑染色、Zea-Longa评分、Morris水迷宫实验分别检测脑梗死面积、神经功能缺损程度及学习记忆能力；采用HE染色、尼氏染色、高尔基-考克斯染色观察脑组织病理形态学变化、尼氏体数量及神经元树突棘密度；利用免疫荧光及蛋白质印迹法检测神经元核抗原（NeuN）、微管相关蛋白2（MAP-2）蛋白表达情况。结果 与青年假手术组比较，衰老假手术组大鼠学习记忆能力下降，表现为逃避潜伏期延长、目标象限停留时间缩短及穿越平台次数减少，同时尼氏体数量减少、神经元树突棘密度降低，NeuN和MAP-2蛋白表达下调（P＜0.05）；相较于衰老假手术组，衰老MCAO/R组大鼠神经功能缺损评分增加，逃避潜伏期延长、目标象限停留时间缩短、穿越平台次数减少，梗死区脑组织神经元坏死，尼氏体数量减少，神经元树突棘密度降低，NeuN及MAP-2蛋白表达下调（P＜0.05）；与衰老MCAO/R组比较，空白血清干预的外泌体组与含药血清干预的外泌体组神经功能缺损评分降低，脑组织病理损伤改善，尼氏体数量增多，逃避潜伏期缩短、目标象限停留时间延长、穿越平台次数增加，神经元树突棘密度增加，NeuN和MAP-2蛋白表达上调（P＜0.05），且含药血清干预的外泌体组改善效果均优于空白血清干预的外泌体组（P＜0.05）。结论 芪芎左归复方可能通过调控骨髓间充质干细胞源性外泌体，缓解衰老MCAO/R大鼠的脑组织病理学变化及减轻神经元损伤，从而提高学习记忆能力及恢复神经功能。关键词：芪芎左归复方;神经功能;脑卒中;大脑中动脉闭塞-再灌注;外泌体;大鼠103|43|0<HTML><网络PDF>更新时间：2026-06-01
- 摘要：目的 探究六味地黄丸干预阿尔茨海默病（AD）的作用机制。方法 采用随机数字表法将20只SD大鼠分为空白血清组和含药血清组，每组10只。含药血清组大鼠灌胃六味地黄丸（1.18g/kg），空白血清组大鼠灌胃等体积生理盐水，每日2次，连续5d，制备六味地黄丸含药血清及空白血清。将BV2细胞（小鼠小胶质细胞系）、N2a/APP695swe细胞（小鼠脑神经瘤细胞系，转染APP695swe基因）共培养，分为：载体对照组、糖蛋白非转移性黑色素瘤蛋白B（GPNMB）过表达组、阴性对照组、GPNMB敲低组，探究GPNMB对共培养体系的作用；空白血清组、含药血清组、阴性对照-含药血清组、GPNMB敲低-含药血清组，探究六味地黄丸含药血清对共培养体系的作用及机制。采用慢病毒转染方法，以相应慢病毒转染BV2细胞48h，再以相应血清干预BV2细胞24h后，与N2a/APP695swe细胞共同接种至共培养体系。采用超高效液相色谱-串联质谱法分析六味地黄丸含药血清主要成分；CCK-8法筛选六味地黄丸含药血清最优体积分数；实时荧光PCR和蛋白质印迹法检测GPNMB敲低慢病毒转染效果；酶联免疫吸附测定法检测N2a/APP695swe细胞上清液β-淀粉样蛋白（Aβ）含量；CCK-8法检测N2a/APP695swe细胞增殖率；蛋白质印迹法检测BV2细胞GPNMB、解整合素样金属蛋白酶10（ADAM10）、苄氯素1（Beclin1）、泛素结合蛋白p62、微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ/Ⅰ（LC3-Ⅱ/Ⅰ）蛋白表达。结果 六味地黄丸含药血清的主要成分为小红参醌丙、山茱萸新苷、大黄酸、D（-）-酒石酸、法巴森、7-去羟基连苯三酚-4-羧酸、覆盆子苷F1、环（苯丙氨酸-亮氨酸）二肽、6-甲腺苷、丹参素。六味地黄丸含药血清最优体积分数为10%。与阴性对照慢病毒转染的BV2细胞比较，GPNMB敲低慢病毒转染的BV2细胞GPNMB mRNA及蛋白表达降低（P＜0.05）。与载体对照组比较，GPNMB过表达组N2a/APP695swe细胞上清液Aβ含量降低，N2a/APP695swe细胞增殖率升高，BV2细胞ADAM10及Beclin1、LC3-Ⅱ/Ⅰ蛋白表达升高，p62蛋白表达降低（P＜0.05）；与阴性对照组比较，GPNMB敲低组N2a/APP695swe细胞上清液Aβ含量升高，N2a/APP695swe细胞增殖率降低，BV2细胞ADAM10、Beclin1、LC3-Ⅱ/Ⅰ蛋白表达降低，p62蛋白表达升高（P＜0.05）。与空白血清组比较，含药血清组和阴性对照-含药血清组N2a/APP695swe细胞上清液Aβ含量降低，N2a/APP695swe细胞增殖率升高，BV2细胞GPNMB、ADAM10、Beclin1及LC3-Ⅱ/Ⅰ蛋白表达升高，p62蛋白表达降低（P＜0.05）；与含药血清组和阴性对照-含药血清组比较，GPNMB敲低-含药血清组N2a/APP695swe细胞上清液Aβ含量升高，N2a/APP695swe细胞增殖率降低，BV2细胞GPNMB、ADAM10、Beclin1及LC3-Ⅱ/Ⅰ蛋白表达降低，p62蛋白表达升高（P＜0.05）。结论 六味地黄丸通过调控GPNMB表达提高小胶质细胞自噬水平，进而清除Aβ沉积，发挥改善AD的作用。关键词：六味地黄丸;糖蛋白非转移性黑色素瘤蛋白B;自噬;小胶质细胞;阿尔茨海默病106|33|0<HTML><网络PDF>更新时间：2026-06-01
